例子问题
例子问题1:帮助使用分离技术
下列哪一种技术从细胞中分离完整的核糖体最有用?
西方墨点法
离心分离
透析
sds - page
离心分离
与细胞器相比,核糖体的分子量相对较小,而与大分子(如蛋白质)相比,其分子量相对较大。几轮离心,使用稍有不同的条件,是一种可行的方法分离完整的核糖体。
SDS-PAGE是一种基于分子量分离变性蛋白质的优良技术。Western blotting用于检测样品中特定蛋白质的存在。透析常用于蛋白质纯化过程。
例子问题2:帮助使用分离技术
__________是一种通过抗体靶向复合物的一个成员来从溶液中提取蛋白质复合物的技术。
Co-immunoprecipitation
南部的印迹
烦恼
质谱分析
Co-immunoprecipitation
从溶液中提取蛋白质复合物的唯一方法是共免疫沉淀。免疫共沉淀涉及使用针对特定蛋白质的大量抗体来捕获感兴趣的蛋白质和与之相关的任何东西(即蛋白质复合物)。然后可以将蛋白质从抗体中洗脱并进行分析。
FRET涉及荧光标记两种蛋白质,在其他可能的用途中,寻找蛋白质-蛋白质相互作用在活的有机体内.Southern blotting是一种用于分离和识别溶液中特定DNA序列的技术。质谱可以用来分析和测序蛋白质,但不直接涉及抗体的使用。
例子问题3:帮助使用分离技术
溴化乙锭通常用于在紫外线下检测DNA凝胶中DNA的存在。溴化乙锭与双链DNA形成什么类型的键来发射荧光?
范德华键
金属结合剂
离子键
共价键
范德华键
溴化乙锭嵌入到DNA双螺旋的疏水内部,并通过范德华相互作用保持结合。溴化乙锭与DNA的结合导致构象移位,从而增加其荧光。
问题4:帮助使用分离技术
一种新的RNA病毒被鉴定出来,基因组的高通量测序产生了两个独特的contigs。哪种方法可以深入了解这种病毒的基因组结构?
使用基于密切相关病毒的探针的Southern blot分析
使用来自测序区域的探针进行Northern blot分析
用引物对测序区域进行PCR
一种变性蛋白凝胶,可以看到病毒颗粒中的所有蛋白质
使用来自测序区域的探针进行Northern blot分析
从测序反应中获得两个不同的contigs表明,这种病毒要么有两条不同的染色体,要么测序反应中存在某种类型的错误。
最直接的测试方法是用探针对两条潜在的染色体进行Northern blot分析。如果它们是唯一的染色体,我们将期望在每个染色体上看到一条与测序产物长度相匹配的条带。如果这是一个错误,两个探针应该产生相同大小的条带,这表明只有一条染色体。
Southern blot检测DNA的存在;因此,这是没有用的。蛋白质凝胶在这种情况下也不会有用,因为我们正试图确定RNA的存在。聚合酶链反应(PCR)也不会有结果,因为它不能对RNA进行。
请注意,逆转录PCR可能很有用,因为它可以将RNA转化为DNA;在这种情况下,如果你认为它是一条染色体,你可以设计多个引物组合。
问题4:帮助使用分离技术
在DNA提取和分离过程中,哪个选项是重要的步骤?
细胞或组织的均质化
从样品中去除蛋白质
脱氧核糖核酸与酒精的沉淀
所有这些
用有机溶剂去除污染物
所有这些
这些都是制造可用DNA提取的重要步骤。首先,组织均质化,通常采用化学或机械方法。然后通过变性将蛋白质从样品中去除。任何污染物都可以通过有机溶剂的多种方法去除。根据情况的不同,还涉及到一些其他步骤,例如从提取物中去除RNA。最后,DNA通过酒精沉淀成纯DNA提取物。
例5:帮助使用分离技术
western blot凝胶中破坏二级、三级和四级蛋白质结构的主要变性剂是什么?
十二烷基硫酸钠(SDS)
过硫酸铵
Tetramethylethylenediamine (tem)
丙烯酰胺
乙二胺四乙酸(EDTA)
十二烷基硫酸钠(SDS)
正确答案是SDS。SDS破坏蛋白质中的非共价键,最终使蛋白质变性。过硫酸铵和TEMED都是用于聚合(或固化)SDS-page凝胶的试剂,用于western blot应用。EDTA在溶液中螯合阳离子,防止可能降解初级氨基酸结构的蛋白酶的活性。丙烯酰胺是在sds -凝胶中聚合的物质,赋予凝胶粘性物理特性。
例子问题1:帮助使用分离技术
白细胞和红细胞在许多物理性质上存在差异,其中之一就是两种细胞类型的密度存在显著差异。红细胞没有细胞核,因此密度小得多,很容易通过简单的离心技术从白细胞中分离出来。然而,有许多密度相似的白细胞亚型,这对研究特定的白细胞类型提出了挑战,因为它们更难分离出来。我们可以利用不同类型的白细胞表达不同的细胞表面分子。
以下哪一种技术对利用不同的细胞表面分子分离出不同类型的白细胞最有用?
离心分离
流式细胞术
南部的印迹
x射线晶体学
Co-immunoprecipitation
流式细胞术
流式细胞术利用抗体特异性的蛋白质表达的单细胞类型。抗体可以被包裹在磁珠上,这些抗体只会将细胞与适当的蛋白质结合,从而“粘在”磁珠上,从而可以从样本中分离出来。离心无法检测到如此小的差异,只有在密度不同时才有用。Co-IP在寻找相互作用或共定位的蛋白质时更合适。Southern blotting用于DNA检测,x射线晶体学用于了解蛋白质结构。