例子问题
例子问题1:其他实验室技术的帮助
在细胞裂解缓冲液中加入氟化钠的目的是什么?
它是一种丝氨酸/苏氨酸磷酸酶抑制剂
它是一种酪氨酸磷酸酶抑制剂
它是半胱氨酸蛋白酶抑制剂
它是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂
它是一种丝氨酸/苏氨酸磷酸酶抑制剂
氟化钠是一种丝氨酸/苏氨酸磷酸酶抑制剂。如果感兴趣的蛋白质被磷酸化,这在细胞裂解缓冲液中是很重要的。氟化钠的存在将阻止磷基在研究之前被丝氨酸/苏氨酸磷酸酶去除。它通常与钒酸钠一起添加到细胞裂解缓冲液中,钒酸钠是一种酪氨酸/碱性磷酸酶抑制剂。
例子问题2:其他实验室技术的帮助
以下哪一种技术可以通过蛋白质结合特定DNA序列的能力来最好地确定蛋白质的相对活性在体外?
电泳迁移率漂移试验(EMSA)
染色质免疫沉淀(ChIP)
免疫印迹
布拉德福德蛋白试验
Co-immunoprecipitation
电泳迁移率漂移试验(EMSA)
正确的答案是电泳迁移率转移试验(EMSA)。在EMSA中,特定的DNA序列被放射性标记,并与蛋白质裂解物或纯化蛋白质一起孵育。然后将蛋白质-DNA混合物装载到非变性凝胶上,按大小分离蛋白质和DNA。被蛋白质结合的DNA比未结合的DNA迁移得慢,而未结合的DNA迁移得快。为了检测放射性,将薄膜暴露在凝胶中,显影和解释。重要的是要记住,放射性是由DNA而不是蛋白质释放的。
例子问题3:其他实验室技术的帮助
两名学生克隆了一种细菌DNA聚合酶到哺乳动物表达载体中。然后,学生们将载体转染到人类组织培养细胞系中,以确定DNA聚合酶是否在人类细胞中保留其固有功能。
学生最适合使用什么技术来确定DNA聚合酶是否在人类细胞中表达?
聚合酶链式反应(PCR)
电泳迁移率漂移试验(EMSA)
免疫印迹
电穿孔
限制消化
免疫印迹
正确答案是Western blot。在Western blot中,细胞蛋白裂解物在变性凝胶上运行,并用特定抗体进行检测。学生研究人员可以检测DNA聚合酶蛋白的存在在细胞裂解物使用特定的抗体聚合酶。
EMSAs确定蛋白质与DNA序列结合的能力,而电穿孔、PCR和限制性内切酶切不是检测蛋白质表达的方法。
问题4:其他实验室技术的帮助
什么技术可以让科学家通过探针- cdna杂交荧光强度来测量基因表达?
染色体组型
DNA微阵列
免疫组织化学
荧光激活细胞分选
原位杂交(ISH)
DNA微阵列
正确答案是DNA微阵列。在DNA微阵列中,短DNA序列(探针)被标记在微阵列芯片上。同一基因的探针聚集在阵列的同一区域。来自样本的cDNA用荧光染料标记,并在芯片上冲洗。如果某个基因高表达,其cDNA将结合各自的探针,并给予比低表达基因更高的强度。
例5:其他实验室技术的帮助
一名学生研究人员用跨膜蛋白的c端抗体对哺乳动物细胞进行间接免疫荧光。首先,学生研究人员不渗透细胞的质膜和染色与蛋白质特异性抗体。其次,研究人员渗透细胞的质膜,并用蛋白质特异性抗体染色。
学生研究员试图通过这两个实验来确定什么?
如果蛋白质定位在高尔基体
质膜渗透时蛋白质定位是否被破坏
如果蛋白质定位在高尔基体
细胞是否能在渗透作用下存活
蛋白质的c端是细胞外还是细胞内
蛋白质的c端是细胞外还是细胞内
正确答案是蛋白质的c端是细胞外还是细胞内。这是一种非常常见的实验室技术,用于确定跨膜蛋白的哪个末端是细胞内和细胞外。由于抗体对蛋白质的c端是特异性的,如果蛋白质的c端是细胞内定位的,我们只能在细胞渗透时才能检测到蛋白质。在未渗透的细胞中,抗体将无法进入细胞,但渗透将允许抗体通过质膜并结合c端。如果c端是细胞外的,抗体无论渗透与否都会结合。
例子问题6:其他实验室技术的帮助
下列哪一项不是将外源DNA引入细胞的有效方法?
感染
这些都不是
电穿孔
转染
转换
这些都不是
所有给出的答案都是将外源DNA引入细胞的有效方法。当与细菌一起工作时,转化是一种通过化学能力将质粒DNA引入细胞的简单方法。电穿孔同时电死细菌和细胞培养细胞以引入外源DNA。如果实验室配备了产生含有外源DNA的活病毒的设备,感染靶细胞也可能是一种可行的方法。最后,转染是指主要用于细胞培养的通过脂质体(含DNA)与细胞膜融合引入外源DNA的过程。
示例问题7:其他实验室技术的帮助
工作在按蚊试图研究血液消化过程的蚊子发现,超过2000个基因通过消化上调或下调。什么样的技术使得像这样研究大量基因的表达水平成为可能?
聚合酶链反应
下一代DNA测序
DNA微阵列
这些都不是
桑格DNA测序
DNA微阵列
微阵列技术可以同时研究数千个基因的表达水平。虽然微阵列不能告诉你任何关于基因的实际序列,但它们是研究大量基因表达水平的唯一选择。利用PCR研究表达水平是可能的,但不是大规模的。
例8:其他实验室技术的帮助
分子遗传学研究各种酶的“等位基因”的早期技术是什么?
同工酶凝胶
异型酶凝胶
这些都不是
Isoenzymatic凝胶
北部的屁股
异型酶凝胶
运行等位酶凝胶是用于这些酶的分子研究的第一个方法之一,这些酶由于具有略微不同的遗传密码(等位基因)而具有略微不同的功能。这个术语特指由遗传变异/等位基因产生的酶变异。
问题9:其他实验室技术的帮助
苯酚/氯仿萃取的目的是什么?
从蛋白质中分离DNA和RNA
从DNA或RNA中分离蛋白质和其他杂质
从细胞裂解物中分离常染色质和异染色质
通过裂解从组织培养细胞中产生蛋白质裂解物
其他答案都没有
从DNA或RNA中分离蛋白质和其他杂质
正确的答案是从DNA或RNA中分离出蛋白质和其他杂质。用苯酚和氯仿进行萃取,将蛋白质和其他杂质从DNA和RNA中分离出来(以悬浮的形式)。接下来,根据使用的盐的类型和浓度,研究人员可以选择性地从添加乙醇的混合物中沉淀DNA或RNA。这是一种从不纯来源获得纯的洁净核糖核酸的简单方法。
例子问题10:其他实验室技术的帮助
以下哪一种技术最有可能使用洗涤剂,如十二烷基硫酸钠?
质膜裂解
所有这些都需要使用洗涤剂
其他答案都没有
小离子和大离子化合物的分离
从RNA和蛋白质中纯化DNA
质膜裂解
正确答案是质膜裂解。虽然像十二烷基硫酸钠这样的洗涤剂通常被用作蛋白质变性剂,但它也通过乳化膜结合的脂质和蛋白质来分解质膜。