正确的答案是引入膜孔。大肠杆菌在37摄氏度时生长最好。然而，温度的升高会导致质膜变得更加流动，从而引入小孔隙，质粒DNA可以通过这些小孔进入细胞。

正确答案是氨苄西林营养琼脂板过期了。质粒表达β -内酰胺酶，一种降解氨苄青霉素的酶。成功转化的细菌将能够在氨苄西林存在下生长，但未转化的细菌不应该生长。由于我们对照转化中的细菌没有β -内酰胺酶引起的氨苄西林耐药，我们预计在任何含有氨苄西林的营养琼脂板上都不会观察到生长。然而，我们观察到这些平板上不受控制的生长，这表明氨苄西林已经过期，不再是转化细菌的可行选择标记物。

退火温度是引物与模板DNA序列结合的最佳温度。这个温度考虑了几个因素:引物中碱基对的数量，鸟嘌呤-胞嘧啶的相对含量，以及它们的熔点。

没有一个选项是正确的。为了成功地将细菌基因克隆到哺乳动物表达载体中，必须完成以下工作:首先，从细菌的cDNA中PCR扩增出细菌基因，该cDNA只包含外显子。其次，用限制性内切酶消化载体的主链，使载体线性化，使细菌基因可以插入到特定的位点(多个克隆位点)。第三，将扩增的细菌基因和消化的载体主干连接在一起，以创建所需的表达结构。

正确答案是cDNA。考虑到这个基因很可能有几个内含子，互补DNA (cDNA)应该被用作模板，因为它只包含外显子。当亚克隆基因到表达载体时，应该只存在编码序列，因为转录的RNA不会像在宿主细胞中那样被处理。

质粒是DNA的圆形片段，可以抵抗外核降解(从DNA末端切下的外切酶)。细菌拥有原生质粒，这些质粒独立于它们的基因组进行复制，并表达通常赋予生存优势的基因。科学家经常将基因克隆到质粒中，并在各种宿主细胞中表达。

弗雷德里克·桑格(Frederick Sanger)于1977年发明了DNA测序的链终止法，该方法自发明以来被广泛用于DNA短序列。这种方法被称为桑格测序。Leroy Hood负责自动化这种方法，Kary Mullis是聚合酶链式反应的发明者，创造DNA副本，E. M. Southern将他的名字用于另一种名为Southerns的DNA研究方法，Craig Venter负责其他后来的DNA测序方法。

聚合酶链式反应需要两个而不是一个合成的引物分子来正确地将DNA分子扩增成新的副本。一个引物连接到所需DNA片段的两端，聚合酶分子从这些位点进行扩增。其他选项都是关于PCR的正确事实。

Cosmids可以处理25-50kb大小的DNA插入。BAC可以处理100-300kb大小的插入，YAC甚至更多。由于插入物尺寸大，这些基因仍被用于棘手的基因组项目，比如北极鱼中的抗冻蛋白基因。质粒一般只能处理5-10kb大小的插入。

这些都是改进桑格技术的重要进展，增加了DNA序列输出。对聚合酶进行修饰可以使热循环反应更快，并将制造的碱基与荧光标记结合。每个碱基有四个不同的荧光标签，便于识别不同的碱基。最后，毛细管色谱法允许DNA测序的巨大并行化。