例子问题
例子问题1:Gre科目考试:生物化学,细胞和分子生物学
科学家想要观察组织样本中特定蛋白质的定位。以下哪个标记对于完成这项任务最有用?
绿色荧光蛋白
他的
硫氧还蛋白
国旗
绿色荧光蛋白
荧光标记是观察蛋白质定位的非常强大的工具。绿色荧光蛋白(GFP)是一种广泛应用的荧光标记。所有其他答案都是用于各种函数的标记。His和FLAG标签通常用于纯化重组蛋白。TRX标签在伴侣蛋白缺乏的生物中用于溶解和协助重组蛋白折叠。
例子问题2:Gre科目考试:生物化学,细胞和分子生物学
下列哪项描述了可能从一个成功的FRET(荧光共振能量转移)实验中获得的信息?
两个相互作用蛋白质之间的距离在活的有机体内
所有的答案
同一蛋白质结构域之间的距离
蛋白质的定位
所有的答案
FRET是一种广泛应用于研究蛋白质-蛋白质相互作用和反应动力学的技术。该技术的工作原理是将荧光团附着在蛋白质上,在适当波长的光刺激下产生荧光。当试图检测两个物体之间的距离时,使用两个荧光团。第一种由外部光源刺激,第二种由被激发的荧光团产生的光刺激。第二个被激发的荧光团产生的光的存在与否可以帮助确定蛋白质之间的相互作用。该技术也适用于蛋白质定位和区域间距离检测。
示例问题5:Gre科目考试:生物化学,细胞和分子生物学
一名科学家正在进行FRAP(光漂白后荧光恢复)实验。为此,他用荧光探针标记了一种蛋白质。最初,荧光色在整个样本中无处不在。他的结果表明荧光可以不在他的样品漂白后,恢复到正常水平。从这个实验可以得出什么结论?
蛋白质被细胞骨架固定住了
蛋白质是不可移动的
蛋白质被嵌入脂质筏中
蛋白质是不稳定的
蛋白质是不可移动的
在FRAP实验中,用荧光团标记一段膜。对膜的一小部分区域进行高强度暴露,用来“漂白”这部分区域,从而产生一小部分零荧光区域。缺乏荧光的恢复只能给我们关于蛋白质流动性的信息:它是不流动的。如果蛋白质是可移动的,那么标记的蛋白质将能够移动到漂白区域,使其恢复荧光状态。
虽然蛋白质被固定在细胞骨架或脂筏的一部分上可能是真的,但实验结果并没有直接得出这些结论。然而,它确实为研究人员指明了正确的方向,让他们更多地了解蛋白质的功能。FRAP并不能告诉我们蛋白质的稳定性。
例子问题2:Gre科目考试:生物化学,细胞和分子生物学
下面哪个标签可以帮助研究人员定位蛋白质在活的有机体内?
一、绿色荧光蛋白
2销售税
3他的
myc承运
一,二,三
第二和第三
一,二,三,四
我只
我只
GFP是一种荧光标记,在帮助蛋白质可视化方面非常有用在活的有机体内.标签会在蛋白质存在的组织中发出绿光。
所有其他的选择都描述了帮助纯化重组蛋白的标签。因为所有这些标记都是从溶解的细胞样本中分离出蛋白质,所以它们在跟踪蛋白质时并不有用在活的有机体内.
例子问题1:帮助生物化学标记
为什么EDTA会对含有6-His标记的蛋白质的检测产生不利影响?
EDTA是一种阳离子螯合剂,它会阻止蛋白质的检测
EDTA会降低6-His的标记
EDTA检测不到6-His标记
6-His标签将与EDTA结合,而不能与抗体结合
EDTA是一种阳离子螯合剂,它会阻止蛋白质的检测
EDTA是金属阳离子的螯合剂。为了检测6-His标签,使用了镍珠。如果EDTA在溶液中,它会螯合镍从珠子和阻止检测蛋白质。
例子问题2:帮助生物化学标记
研究人员通常将血凝素(HA)或FLAG标签融合到蛋白质上,以研究它们的细胞定位和功能。这个标签的目的是什么?
方便标记特异性抗体的检测
使突变蛋白不再保持原有功能
这些
由于标签的存在,以促进蛋白质的敲除
以促进蛋白质的过度表达,因为标签的存在
方便标记特异性抗体的检测
当标记一个蛋白质的n端时,主要目的是用一种广泛商业的抗体来检测该蛋白质。许多研究人员打算研究的蛋白质没有特定的抗体,因此,利用HA或FLAG标记可以很容易地检测。该标签并不打算改变原生蛋白质的功能,也不打算改变其在细胞中的表达水平。
示例问题3:帮助生物化学标记
当用生物化学方法标记蛋白质时,下列哪项不需要考虑?
生化标记与编码序列在同一帧内
生物化学标记应是构成性和独立性表达
这种生物化学标记不会破坏天然蛋白质的折叠
生化标签可以融合到终点站
生化标签可以融合到终点站
生物化学标记应是构成性和独立性表达
生物化学标记蛋白质的目的之一是方便其检测。因此,只有当蛋白质被表达时标签才被表达是很重要的。此外,帧内标记通常融合到或-蛋白质的末端,以确保对蛋白质的原生折叠和结构的破坏最小。
示例问题4:帮助生物化学标记
下列哪项不是科学家们融合到感兴趣的蛋白质上的常见生化标签?
人流感血凝素(HA)标签
国旗标签
Polyhistidine(他的)标签
谷胱甘肽s转移酶(GST)标记
十二烷基硫酸钠(SDS)标签
十二烷基硫酸钠(SDS)标签
研究人员通常使用FLAG, His, HA和GST标签进行生物化学标记蛋白质的实验。通常,这些标签在框架内融合到-蛋白质的末端,以减少对原生蛋白质折叠的破坏。十二烷基硫酸钠(SDS)是一种阴离子洗涤剂,当应用于蛋白质时,它能破坏蛋白质折叠的二级和三级结构。SDS在Western blot中最常用。
示例问题4:帮助生物化学标记
当创建绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白时,以下哪项是正确的?
所有的这些
绿色荧光蛋白不能破坏天然蛋白质的折叠结构
GFP通常与N端或c端结合
表达融合蛋白表达载体必须适合在期望的宿主中表达
GFP必须与天然蛋白质在同一框架内
所有的这些
所有的选项都为真。创建荧光标记的蛋白质是一种常见的实验室实践,以可视化蛋白质的亚细胞定位。融合蛋白被亚克隆到表达载体中,因此,表达载体适合于表达蛋白的物种是很重要的。此外,为了尽量减少对天然蛋白质折叠的破坏,荧光标记通常被添加到N端或c端。最后,为了确保翻译不被打断,融合必须与原生蛋白质在框架内。
示例问题5:帮助生物化学标记
下列哪项不是可以用生化标记来检测蛋白质的技术?
北部的污点
活细胞成像
电泳迁移率超移分析
间接免疫荧光法
免疫印迹
北部的污点
正确答案是北方污点。Northern blot用于检测或量化样本中的RNA,以测量基因表达。生物化学标记的蛋白质可以通过Western blot检测,使用标记特异性抗体。表达标记蛋白的细胞也可以通过间接免疫荧光使用标记特异性抗体检测到。用荧光蛋白标记一种蛋白质可以让研究人员用活细胞成像跟踪蛋白质在细胞中的定位和运动。最后,电泳迁移率转移试验(EMSA)检测蛋白质与DNA结合的能力,但超级转移是将感兴趣的蛋白质与抗体孵育,以确定哪个蛋白质与DNA结合。在这种情况下,标记的蛋白质可以在EMSA上检测。